Vinaka vakalevu na nomu sikova na Nature.com.Na ivakarau ni barausa o vakayagataka tiko e vakaiyalayala na veitokoni me baleta na CSS.Me baleta na veika vinaka e sotavi, keitou vakatura mo vakayagataka e dua na barausa vakavoutaki (se bokoca na ivakarau ni veiganiti ena Initaneti Explorer).Ena gauna oqo, me vakadeitaka na veitokoni tomani tikoga, keitou na vakaraitaka na vanua ka sega na ivakarau kei na JavaScript.
Na veitiki ni insulin (NPs) kei na levu ni vakavodoki ni itukutuku era sa kunea na veimataqali kerekere ena veimataqali fomu ni veiqaravi. Na cakacaka oqo e kena inaki me vakalewai na kena revurevu ni vakamamacataki-vakamamacataki kei na ivakarau ni vakamamacataki-vakamamacataki ena ituvatuva ni veitiki lailai ni chitosan vakavodoki ni insulin, vata kei na sega na mannitol me vaka e dua na cryoprotectant. dehydration, na levu ni tikitiki ni chitosan / sodium tripolyphosphate / insulin kauveilatai-veiwekani nanoparticles a vakavinakataki me 318 nm, na PDI e 0.18, na cakacaka ni encapsulation e 99.4%, kei na vakavodoki e 25.01% na kena buli. ivakarau ni vakamamacataki-vakamamacataki ka sega ni vakayagataki na mannitol, maroroya na nodra isema ni tikitiki ni spherical.Vakatautauvatataki ki na mannitol-e tiko kina na nanoparticles vakawaicalataki ena dua vei rau na veivakabulabulataki, na mannitol-galala ni veivakamarautaki-vakamamacataki nanoparticles e vakaraitaka talega na lailai duadua na kena ibalebale na levu ni tikitiki (376 nm) kei na cecere duadua ni vakavodoki2 kei na2 na lewena. (98.7%) kei na PDI (0.20) ena kena vakamamacataki se vakamamacataki na iwalewale ni vakamamacataki. Na nanoparticles mamaca ena vakamamacataki ni vakamamacataki ka sega na mannitol e vakavuna talega na kena sereki totolo duadua na insulin kei na cecere duadua ni kena vakayagataki na sela. iwalewale ni vakamamacataki ni freeze, bulia na rawa ni vakavodoki levu cake, lailai na gagadre ni additive kei na isau ni cakacaka bibi na kena yaga.
Me tekivu mai na kena kunei ena 19221,2,3, na insulin kei na kena vakavakarau ni wainimate sa vakabulai na nodra bula na tauvimate ena mataqali 1 ni matenisuka (T1DM) kei na mataqali 2 ni matenisuka (T1DM). Na tamata e laurai vei ira na matenisuka mataqali 1 era gadreva na veisele ni insulin ena vo ni nodra bula. E vuqa na tauvimate era kunei taumada ena mataqali 2 ni matenisuka era gadreva talega na veisele ni insulin balavu. na veiqaravi ni insulin, era sa vulici vakalevu tiko5 me vaka ni tu vei ira na kaukauwa me ra vakalesuya mai na ivakarau ni bula ni rauta ni 5 na bilioni na tamata e tauvi ira na matenisuka e vuravura raraba.
Na tekinolaji ni nanoparticle sa vakarautaka e dua na toso bibi ena kena sagai me tauri na insulin ni gusu 4, 6, 7. E dua e vakavinakataka ka taqomaka na insulin mai na vakacacani me baleta na vakau vakatabakidua ki na vanua ni yago vakatabakidua. vakalailaitaka na bioavailability ni insulin-vakavodoki na veitiki lalai8.Me kena ikuri, na kemikali ni tudei ni polymer matrix ni nanoparticles kei na insulin e dodonu talega me vakasamataki me vakadeitaka na tudei ni insulin nanoparticles (NPs).
Ia, na vakacegu-vakamamacataki e gadrevi kina na ikuri ni cryoprotectants me tarova na ituvatuva ni spherical ni NPs mai na kena vakaleqai na lomaocaoca vakamisini ni karisitala ni aisi. sega ni veiganiti me baleta na kena buli na pauta mamaca na veivakarautaki, me vaka na papa ni gusu kei na iyaloyalo ni gusu, ena vuku ni kena gadrevi na levu ni nanoparticles mamaca me rawati kina na katubaleka ni veiqaravi ni insulin.
Na vakamamacataki ni spray e dua na kilai levu ka sega ni sau levu na iwalewale ni cakacaka-vakarautaki me baleta na kena buli na pauta mamaca mai na veitiki ni wai ena tabana ni wainimate10,11.Lewa ena iwalewale ni buli ni tikitiki e rawa kina na encapsulation dodonu ni vica na bioactive na kena revurevu 12, 13 e .Kuria, na preparation ni tech. encapsulated proteins me baleta na veiliutaki ni gusu.Ena gauna ni vakamamacataki ni spray, na wai evaporates totolo sara, ka vukea me maroroi kina na ivakarau ni katakata ni uto ni tikitiki lailai11,14, ka rawa kina na kena vakayagataki me encapsulate na veitiki ni katakata-vakasama. ingredients11,14.E sega ni vaka na vakacegu-vakamamacataki, homogenization ni bera na encapsulation ena vakamamacataki-vakamamacataki e vakavinakataka na cakacaka ni vakamamacataki ena gauna ni vakasavasavataki.
Na vakadidike oqo e ripotetaka na kena buli na NPs vakavodoki ena insulin ena kena vakayagataki na chitosan kei na sodium tripolyphosphate ena kena vakayagataki e dua na iwalewale ni gel ni ion. Ni oti na vakawaicalataki, a vakadikevi na nodra morphology mai na SEM. iwalewale ni vakaoti wai e vakatovotovotaki talega ena kena vakatautauvatataki na nodra taqomaki ni insulin, itovo ni sereki, kei na kena rawati na sela.
Na pH ni iwali veiwaki kei na ratio ni chitosan kei na insulin e rua na ka bibi e tara na levu ni tikitiki kei na encapsulation vinaka (EE) ni iotioti ni NPs, me vaka ni ra tara vakadodonu na iwalewale ni gelation ni ionotropic. 1a, me vaka na tubu ni pH mai na 4.0 ki na 6.0, na ivakatautauvata ni levu ni tikitiki (nm) lailai sobu ka tubu vakalevu na EE, ni gauna e tubu kina na pH ki na 6.5, sa tekivu me tubu na ivakatautauvata ni levu ni tikitiki kei na EE e sega ni veisau. O koya gona, na ituvaki ni vakavakarau vinaka duadua ena vakadidike oqo (pH 6.0, chitosan/insulin levu ni 2.5:1) era a vakayagataki me vakarautaki kina e dua na ituvaki ni vakavakarau oqo. 1c), na PDI e 0.18, na cakacaka ni vakacurumi e 99.4%, na zeta rawa ni 9.8 mv, kei na vakavodoki ni insulin e 25.01% (m / m ). vakabalavu kei na veivakaduiduitaki kei na kena levu vakatautauvata (Fig. 1d).
Na paramita ni vakavinakataki ni insulin: (a) na kena revurevu ni pH ena kena ibalebale na kena rabailevu kei na encapsulation ni kaukauwa (EE) ni insulin (vakarautaki ena 5: 1 na levu ni chitosan kei na insulin); (b) chitosan kei na Veivakauqeti ni levu ni insulin ena kena ibalebale na kena rabailevu kei na kena vakayagataki (EE) ni insulin NPs (vakarautaki ena pH 6); (c) veiwaseyaki ni levu ni veitiki ni veitiki ni insulin vakavinakataki; (d) TEM na iyaloyalo lailai ni NPs ni insulini vakavinakataki.
E kilai levu ni chitosan e dua na polyelectrolyte malumalumu kei na dua na pKa ni 6.5. E vinaka na kena isau ena itukutuku ni asidi baleta ni kena ilawalawa amino levu e protonated mai na ions ni haidrojini15. isoelectric tikina ni 5.3.Me vaka ni sa vakayagataki na chitosan me vaka e dua na iyaya ni ubi, ena kena vakalevutaki na kena iwasewase, na matolu ni tabana e tautuba ni nanoparticles e tubu vakatautauvata, ka vakavuna e dua na ivakatautauvata levu cake ni tikitiki ni levu. 2.5:1, ka sega ni dua na veisau levu ena EE ni sa tubu tikoga na ratio.
Me ikuri ni ivakarau ni chitosan kei na insulin, pH talega e dua na itavi bibi ena kena vakarautaki na NPs.Gan kei na so tale. 17 vulica na kena revurevu ni pH ena levu ni tikitiki ni chitosan nanoparticles. Era kunea e dua na lutu tomani tikoga ena levu ni tikitiki me yacova ni sa yacova na pH na 6.0, kei na dua na tubu levu ena levu ni tikitiki e laurai ena pH> 6.0, ka sa salavata kei na noda raica. sausaumi, vakakina, taleitaka na veimaliwai vakalivaliva kei na chitosan / sodium tripolyphosphate (TPP) vereverea, ka vakavuna na levu ni tikitiki lailai kei na EE cecere .Ia, ni sa veisautaki na pH ki na 6.5, na ilawalawa amino ena chitosan era a deprotonated, ka vakavuna na chitosan cecere amino pH ni TPP. ka vakavuna na lailai ni kauveilatai-veiwekani, levu cake na iotioti ni ivakatautauvata ni tikitiki ni levu kei na lailai ni EE.
Na vakadidike ni morphological ni NPs vakamamacataki kei na spray vakamamacataki e rawa ni dusimaka na digidigi ni vinaka cake na dehydration kei na pauta ni buli iwalewale.Na iwalewale vinakati e dodonu me vakarautaka na tudei ni wainimate gaga, ibulibuli ni tikitiki vakatautauvata, vakavodoki ni wainimate gaga cecere kei na solubility vinaka ena iwali taumada.Ena vuli oqo, me vakatautauvatataki vinaka cake na insulin se%1 E vakayagataki na mannitol me vaka e dua na vakailesilesi ni bulking se cryoprotectant ena veimataqali pauta mamaca me baleta na vakamamacataki ni vakacegu kei na vakamamacataki ni spray. (SEM).E vica na veitiki ni discrete era a kunei ena pauta ni oti na vakawaicalataki (Fig. 2e).Na veika oqo e vakaraitaka ni levu na NPs era a vakacacani ena gauna ni vakacegu-vakamamacataki ka sega e dua na cryoprotectant. 2b, d, f, h). sega na mannitol kei na NPs vakamamacataki-vakamamacataki ka vakamamacataki-vakamamacataki vata kei na mannitol e rawata na pauta vinaka ni NPs (iVakaraitaki. 2f, g, h).Na levu cake ni vanua ni dela ni maliwa ni veitiki ni dela ni, na cecere ni solubility ka vakakina na cecere ni iwiliwili ni sereki.
Na ivakarau ni veimataqali NPs ni insulini vakawaicalataki: (a) iyaloyalo ni SEM ni NPs ni insulini vakalivalivataki ka sega na mannitol; (b) iyaloyalo ni SEM ni NPs ni insulini vakamamacataki kei na manitoli; (c) NPs ni inulini vakamamacataki-vakamamacataki ka sega na manitol SEM iyaloyalo ni ; (d) iyaloyalo ni SEM ni inulini NPs vakasavasavataki-vakamamacataki ena manitol; (e) iyaloyalo ni pauta ni inulini NPs vakalivalivataki ka sega na manitol; (f) iyaloyalo ni NPs ni insulini vakamamacataki kei na manitol; ( g) Iyaloyalo ni pauta ni NPs ni insulini vakamamacataki ka sega na manitol; (h) iyaloyalo ni pauta ni NPs ni insulini vakamamacataki kei na manitol.
Ena gauna ni vakamamacataki-vakamamacataki, mannitol cakacaka me vaka e dua na cryoprotectant, maroroya na NPs ena dua na fomu amorphous ka tarova na vakacaca mai na karisitala ni aisi19. Ena kena veibasai, e sega ni dua na ikalawa ni vakamamacataki ena gauna ni vakamamacataki ni vakamamacataki. vakamacalataki.Ia, e rawa ni se cakacaka tikoga na mannitol me vaka e dua na filler ena iwalewale ni vakamamacataki-vakamamacataki me solia vei ira na NPs e dua na ituvatuva vakaitamera cake20 (Fig. 2d), ka vukea me rawati kina na itovo ni sereki vakatautauvata ni NPs vakaoqo. manitol (iTaba 2b, d), ka rawa ni baleta na kena kumuni na manitol ena uto ni tikitiki vata kei na insulini e vakacurumi. Me.Chitosan layer.E dodonu me da kila ni ena vakadidike oqo, me rawa ni vakadeitaka ni sa tudei tikoga na isema ni spherical ni oti na dehydration, na ratio ni mannitol kei na chitosan e maroroi tu ena 5:1, me rawa kina ni dua na levu ni filler e rawa ni vakalevutaka talega na levu ni tikitiki ni NPs mamaca..
Fourier veisautaki infrared vakalailaitaki taucoko ni vakasama (FTIR-ATR) spectroscopy vakatakilakilataki na veiwaki vakayago ni insulin galala, chitosan, chitosan, TPP kei na insulin. Me vaka e sa ripotetaki oti, na tubu oqo ena kaukauwa e semati ki na veiwekani ena maliwa ni chitosan, TPP kei na insulin. na kena ni insulin, vakalevutaka na kaukauwa ni carbonyl (1641 cm-1) kei na amine (1543 cm-1) beleti.Na ilawalawa ni tripolyphosphate ni TPP era semati ki na ilawalawa ni amoniumi ena chitosan, ka bulia e dua na ilawalawa ena 1412 cm-1.
FTIR-ATR spectra ni insulin galala, kitosan, veiwaki vakayago ni kitosan / TPP / kitosan kei na NPs vakawaicalataki ena iwalewale duidui.
Kuria, na veika oqo e salavata kei na kena e vakaraitaki ena SEM, ka vakaraitaka ni NPs encapsulated a tu ga ena gauna e vakawaicalataki kina ka vakamamacataki ena mannitol, ia ena kena sega na mannitol, na FTIR-ATR galalataki-vakamamacataki e vakavuna na veitiki ni encapsulated. ki na veiwaki vakayago ni chitosan, TPP, kei na insulin.Na kena isau oqo e vakaraitaka ni sa sega tale ni tiko na veiwekani ni kauveilatai ena maliwa ni chitosan, TPP kei na insulin ena NPs vakamamacataki-vakamamacataki ka sega na mannitol. NPs ni insulini vakawaicalataka, e vakayagataki ga na NPs vakalivalivataki, vakamamacataki ena spray, kei na NPs sega ni mannitol me baleta na veivakatovolei ni veivakavoui kei na NPs sega ni mannitol ena vuku ni kena vakacacani na NPs sega ni mannitol ena gauna ni vakawaicalataki. veivosakitaka.
E vakayagataki na dehydration me baleta na maroroi ni gauna balavu kei na kena vakayagataki tale ki na veivakarautaki tale eso. Na rawa ni NPs mamaca me vakavoutaki ni oti na kena maroroi e bibi sara me baleta na nodra vakayagataki ena veivakarautaki duidui me vaka na papa kei na iyaloyalo. ni spray-vakamamacataki kei na vakacegu-vakamamacataki insulin nanoparticles kei na mannitol vakalevutaki vakalevu (Teveli 1). PDI kei na EE era sega ni veisau vakalevu (p > 0.05) ni oti na kena cokovata tale na NPs kece ena vakadidike oqo (Teveli 1). vakavodoki ni lyophilized kei na vakasavasavataki-vakamamacataki na mannitol nanoparticles (Teveli 1).Ena kena veibasai, na insulin icolacola ni NPs vakasavasavataki-vakamamacataki ka sega na mannitol e tiko ga me vaka e liu (Teveli 1).
E kilai levu ni na vakavodoki ni nanoparticles e bibi sara ni vakayagataki me baleta na inaki ni veisoliyaki ni wainimate gaga.Me baleta na NPs kei na vakavodoki lailai, levu sara na iyaya e gadrevi me yacovi kina na icurucuru ni veivakabulabulataki.Ia, na viscosity cecere ni vakasama cecere vakaoqo ni NP e vakavuna na sega ni veiganiti kei na formula2. .Me kena ikuri, e rawa talega ni vakayagataki na NPs ni insulin me caka kina na papa kei na biofilms viscous23, 24, ka gadrevi kina na vakayagataki ni levu ni NPs ena ivakatagedegede ni vakavodoki lailai, ka vakavuna na papa lelevu kei na biofilms matolu ka sega ni veiganiti me baleta na vakayagataki ni gusu. mannitol-galala ni spray-vakamamacataki NPs e rawa ni solia e vuqa na veivakalougatataki taleitaki me baleta na iwalewale ni veisoliyaki veisau oqo.
Na NPs kece e vakawaicalataki era maroroi tu ena friji me tolu na vula.Na veika e rawati ena SEM e vakaraitaka ni sega ni veisau vakalevu na morphology ni NPs kece e vakawaicalataki ena loma ni tolu na vula ni maroroi (Fig. 4). gauna ni maroroi (Teveli 2).Ia, na ivakatautauvata ni levu ni tiki ni nanoparticles kece e tubu.Na levu ni tiki ni NPs vakasavasavataki-vakamamacataki ka sega na mannitol vakalevutaki ki na 525 nm, ia na kena ni vakasaqa-vakamamacataki kei na vakamamacataki-vakamamacataki NPs vata kei na mannitol vakalevutaki ki na 872 kei na 921 nm (vakadodonutaki2).
Na ibulibuli ni veimataqali NPs ni insulini vakawaicalataki maroroi me tolu na vula: (a) iyaloyalo ni SEM ni NPs ni insulini vakalivalivataki kei na mannitol; (b) iyaloyalo ni SEM ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki ka sega na mannitol; (c) sega na manitol SEM iyaloyalo ni NPs ni insulini vakamamacataki-vakamamacataki.
Kuria, era a laurai na veivakacacani ena veivakavoui ni insulin nanoparticles vakasavasavataki-vakamamacataki ena mannitol kei na vakacegu-vakamamacataki (Fig. S2). Oqo e rawa ni vakavuna na veitiki lelevu sega ni vakavinakataki ena wai. nanoparticles e rawa ni rawati ka sega kina e dua na veivakasinaiti se cryoprotectants.
Na maroroi ni insulin a vakatovolei ena pH = 2.5 veimama kei na pepsin, trypsin, kei na α-chymotrypsin me vakaraitaka na kena rawa ni taqomaki na NPs mai na enzymatic digestion ni oti na vakacaca ni wai. ena loma ni 4 h ena tolu kece na veiqaravi ni veivakabulabulataki (iVakaraitaki. 5a-c).Ena kena veibasai, na veivakatovolei ni vakaoti ni insulin ni NPs vakamamacataki-vakamamacataki ena mannitol kei na NPs vakamamacataki-vakamamacataki vata kei na sega na mannitol e vakaraitaka na veitaqomaki cecere sara ni NPs oqo mai na veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki, ka sa tautauvata kei na kena ni veivakabulabulataki vou). ni nanoparticles ena pepsin, trypsin, kei na α-chymotrypsin, e sivia na 50%, 60%, kei na 75% ni insulin e rawa ni taqomaki ena loma ni 4 h, vakatautauvata (iVakaraitaki. 5a-c). na vakacegu-vakamamacataki kei na mannitol e rawa ni maroroya na insulin-taqomaki ni rawa ni NPs ni oti na vakawaicalataki.
Taqomaki kei na itovo ni sereki ni NPs ni insulin vakawaicalataki: (a) taqomaki ni insulin ena iwali ni pepsin; (b) taqomaki ni insulin ena iwali ni trypsin; (c) taqomaki ni insulin ena iwali ni α-kimotiripisi; ( d) Na itovo ni sereki ni NPs vakawai ena pH = 2.5 na iwali; (e) na itovo ni sereki ni NPs vakawai ena pH = 6.6 na iwali; (f) na itovo ni sereki ni NPs vakawai ena pH = 7.0 na iwali.
Na NPs ni insulini mamaca vou ka vakavoutaki era a vakasucumi ena veimataqali buffers (pH = 2.5, 6.6, 7.0) ena 37 ° C, vakatotomuria na ituvaki ni pH ni kete, duodenum, kei na kete lailai e cake, me dikevi kina na kena revurevu ni insulini ena veivakacacani ni insulini. Na itovo ni sereki ena veivanua duidui.Tikina ni gacagaca ni kete.Ena pH = 2.5, na NPs ni insulin-vakavodoki kei na NPs ni insulini mamaca e vakaraitaka e dua na imatai ni sereki ni burst ena loma ni imatai ni dua na auwa, ka tarava mai e dua na sereki vakamalua ena loma ni 5 na auwa ka tarava (Fig. 5d na kena isau e totolo duadua na kena isau). desorption ni dela ni protein ni molecules ka sega ni taucoko na kena vakayagataki ena ituvatuva ni loma ni tikitiki.Ena pH = 6.5, na NPs ni insulin-vakavodoki kei na NPs ni insulin mamaca vakavoutaki e vakaraitaka e dua na sereki malumu ka vakamalua ena 6 h, me vaka na pH ni iwali ni veivakatovolei e tautauvata kei na kena ni NPs. voleka ni vakacacani taucoko ena loma ni imatai ni rua na auwa (iVakaraitaki. 5f).Oqo baleta ni deprotonation ni chitosan e yaco ena pH cecere, ka vakavuna e dua na rede ni polymer lailai ni veivakacacani kei na sereki ni insulin vakavodoki.
Kuria, na insulin NPs vakamamacataki-vakamamacataki ka sega na mannitol e vakaraitaka e dua na itukutuku ni sereki totolo cake mai na so tale na NPs vakawaicalataki (Fig. 5d-f).Me vaka e vakamacalataki taumada, na insulin NPs vakavoutaki vakamamacataki sega na mannitol e vakaraitaka na lailai duadua na tikitiki ni levu. na dela ni, ka vakavuna na kena vakagalalataki totolo na wainimate gaga26.
Na cytotoxicity ni NPs a vakadikevi ena MTT assay.Me vaka e vakaraitaki ena itaba S4, na NPs kece ni vakawaicalataki e kunei ni sega ni dua na kena revurevu bibi ena bula ni sela ena vakasama ni 50-500 μg / ml, e vakaraitaka ni NPs kece ni vakawaicalataki e rawa ni vakayagataki vakavinaka me yaco ki na katubaleka ni veiqaravi.
Na ate sa ikoya na gacagaca levu e vakayagataka kina na insulin na kena cakacaka vakayago. Na sela ni HepG2 e dua na laini ni sela ni hepatoma ni tamata e dau vakayagataki me vaka e dua na ivakaraitaki ni hepatocyte ena vitro. laser vakadidike ena kena vakayagataki na drodro ni cytometry kei na raivotu ni oti e vica na auwa ni veivakabulabulataki kei na insulin galala ni FITC ena dua na vakasama ni 25 μg / mL, vakarautaki vou na FITC insulin-vakavodoki NPs kei na FITC insulin-vakavodoki NPs ena tautauvata ni insulin vakasama. vakarusai ena gauna ni vakalutu wai ka sega ni vakatovotovotaki ena veivakatovolei oqo.Na kaukauwa ni kaukauwa ni kaukauwa ni kaukauwa ni insulin vou vakarautaki, NPs vakamamacataki ena mannitol, kei na NPs vakamamacataki ena spray kei na sega na mannitol (iVakaraitaki. ilawalawa, vakatautauvata (Fig. 6b).Na veika oqo e vakaraitaka ni insulin encapsulated e kaukauwa cake ena kena vakayagataki na sela mai na insulin galala, vakabibi ena vuku ni lailai ni levu ni insulin-vakavodoki nanoparticles e caka ena vuli.
HepG2 na sela ni oti na 4 h ni vakasucu kei na NPs vou vakarautaki kei na NPs vakawaicalataka: (a) Veisoliyaki ni FITC-inisulini ni HepG2 na sela.
Vakakina, na iyaloyalo ni CLSM e vakaraitaka ni FITC fluorescence kaukauwa ni vakarautaki vou FITC-inisulini-vakavodoki NPs kei na FITC-inisulini-vakavodoki spray-vakamamacataki NPs (sega na mannitol) e kaukauwa cake sara mai vei ira na ivakaraitaki tale eso (iVakaraitaki. 6a). veivakacacani ki na vakayagataki ni sela, ka vakavuna na lailai ni insulin proliferation.Na veika oqo e vakaraitaka ni mannitol-galala ni spray-vakamamacataki NPs vakaraitaka na cecere duadua ni vakayagataki ni sela baleta na nodra levu ni tikitiki e lailai mai na kena ni NPs ni vakacegu-vakamamacataki ni oti na kena vakawabokotaki tale.
Na chitosan (ivakatautauvata ni bibi ni molecule 100 KDa, 75-85% deacetylated) a voli mai Sigma-Aldrich. (Oakville, Ontario, Kenada). Amerika).
Vakarautaka e dua na 1 mg/ml CS iwali ena kena vakawabokotaki ena wai distilled vakarua (wai DD) e tiko kina na 0.1% asidi asidi.Vakarautaka na 1 mg/ml iwali ni TPP kei na insulin ena kena vakawaicalataki ira ena wai DD kei na 0.1% asidi asidi poly, vakatautauvata. homogenizer (Brinkmann Ind. Westbury, NY, Amerika).Na iwalewale ni vakavakarau e vakaoqo: imatai, 2ml ni TPP iwali e vakacurumi ki na 4ml ni insulin iwali, kei na veiwaki e vakauqeti me baleta na 30min ka taucoko na veiwaki. (10,000 rpm).Na veiwaki era a maroroi tu ena ruku ni veivakauqeti totolo (15,000 rpm) ena dua na taubale ni aisi me baleta na 30 na miniti, ka ra sa vakadodonutaki ki na dua na pH me rawati kina na kauveilatai-semati ni insulin NPs. taubale ena kena vakayagataki e dua na probe-mataqali sonicator (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Jamani).
Na insulin NPS a vakatovolei me baleta na Z-ivakarau ni diamita, ivakatakilakila ni polydispersity (PDI) kei na zeta rawa ni vakayagataki na veivakarautaki ni rarama kaukauwa (DLS) ena kena vakayagataki e dua na Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, Austria) ena kena vakawaicalataki ira ena wai DD ena 25°C. (TEM) (Hitachi, Tokio, Japani), kei na iyaloyalo era a qai vakadikevi ena kena vakayagataki na parokaramu ni komipiuta ni iyaloyalo ni Hitachi (Hitachi, Tokio, Japani). 500 xg me baleta na 30 min. 4.6 mm × 150 mm, Agilent, Amerika) ka kunei ena 214 nm.Na iwasewase ni veilakoyaki e acetonitrile kei na wai, e tiko kina na 0.1% TFA, na veitarataravi ni gradient mai na 10/90 ki na 100/0, ka cici me baleta na 10 na miniti. a vakarautaki ki na 20 °C.Vakasamataka na pasede ni EE kei na LC ena kena vakayagataki na veivakatautauvatataki.(1) kei na veivakatautauvatataki.(2).
E duidui na CS/inisulini ratios mai na 2.0 ki na 4.0 era a vakatovolei me vakavinakataki kina na iwali ni NP.E duidui na levu ni iwali ni CS era a vakacurumi ena gauna ni vakavakarau, ni maroroi tudei na veiwaki ni inilini/TPP. TPP kei na CS).Na EE kei na levu ni tiki ni inilini nanoparticles era a vakatovotovotaki ena duidui na pH kei na CS / inilini levu ni ratios me vakavinakataki kina na kena tauyavutaki na inilini NPs.
Na optimized insulin NPs era a biu ena koniteina ni aluminiumi ka ubi ena tissue tightened vata kei na so na tepi.Oti oya, na koniteina screwed era a biu ena dua na Labconco FreeZone vakamamacataki (Labconco, Kansas Siti, MO, Amerika) vakarautaki ena dua na vakamamacataki ni trey. na imatai ni 2 h, kei na 0 ° C kei na 0.120 Torr me baleta na vo ni 22 h ni 24 h me rawati kina na NPs ni inulini mamaca.
Buchi lailai spray vakamamacataki B-290 (BÜCHI, Flawil, Suwitisiladi) a vakayagataki me vakatubura na insulin encapsulated.Na ivakatagedegede ni vakamamacataki digitaki era: katakata 100 °C, drodro ni kakana 3 L/min, kei na drodro ni kasi 4 L/min.
Na insulin NPs ni bera kei na oti na vakacacani ni wai era a vakatakilakilataki ena kena vakayagataki na spectroscopy ni FTIR-ATR. Na ivakarau ni sikinala e rawati mai na 16 na vakadidike ena dua na vakatulewa ni 4 cm2 ena ivakarau ni vakawasoma ni 4000-600 cm2.
Morphology ni mamaca ni insulin NPs a vakatovotovotaki ena iyaloyalo ni SEM ni mamaca-mamaca kei na spray-mamaca na insulin NPs ka tauri mai na dua na Helios NanoLab 650 Vakabibitaki na ion bimi-vakadidike ni ioni (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, Amerika). Na paramita levu e vakayagataki na volitika 5 keV kei na gauna oqo 30 mA.
Na NPs kece ni insulin sa vakawaicalataki era a vakawaicalataki tale ena wai dd. Na levu ni tikitiki, PDI, EE kei na LC era a vakatovolei tale ena kena vakayagataki na iwalewale vata ga e tukuni taumada me vakalewai na nodra vinaka ni oti na vakawaicalataka. maroroi ena friji me tolu na vula.Ni oti e tolu na vula ni maroroi, NPs era a vakatovolei me baleta na levu ni tikitiki ni morphological, PDI, EE kei na LC.
Vakawaicalataka na 5 mL ni NPs vakavoutaki ena 45 mL e tiko kina na wai ni kete vakatautauvatataki (pH 1.2, e tiko kina na 1% pepsin), wai ni kete (pH 6.8, e tiko kina na 1% trypsin) se na iwali ni chymotrypsin (100 g/mL, ena buffer ni phosphate, pH7c). NPs ni oti na vakawaicalataki.Era a vakasucumi ena 37°C kei na totolo ni veivakacacani ni 100 rpm.500 μL ni iwali e a kumuni ena veigauna duidui kei na vakasama ni insulin e vakadeitaki ena HPLC.
Na itovo ni sereki ena vitro ni vakarautaki vou ka vakawaicalataka na insulin NPs a vakatovolei ena iwalewale ni taga ni veivakabulabulataki (bibi ni molecule musuki-off 100 kDa, Spectra Por Inc.). saline, PBS) me vakatotomuria na pH ni vanua ni kete, duodenum, kei na kete lailai e cake, vakatautauvata.Na ivakaraitaki kece era a vakatuburi ena 37 °C kei na luluqa tomani tikoga ena 200 rpm. vakavoutaka sara ga na iwiliwili ena dialysate vou.Na vakadukadukalitaki ni insulin ena wai e vakadikevi ena HPLC, kei na iwiliwili ni insulin vakagalalataki mai na veitiki lalai e vakarautaki mai na ratio ni insulin galala vakagalalataki ki na insulin taucoko e vakacurumi ena veitiki lalai (Ivakatautauvata 3).
Na laini ni sela ni tamata HepG2 era a tubu ena 60 na mm na kena rabailevu ena kena vakayagataki na Dulbecco ni veisautaki ni ikeli (DMEM) ka tiko kina na 10% ni serum ni bulumakau, 100 IU/mL penisilini, kei na 100 μg/mL streptoulcin ena 95% ivakarau ni katakata, kei na 5% CO2. e dua na kaukauwa ni 5 × 104 na sela/ml.
Na MTT assay a vakayagataki me vakalewai na cytotoxicity ni vakarautaki vou ka vakawaicalataka na insulin NPs30.HepG2 na sela era a vakatuburi ena peleti 96-vinaka ena dua na kena levu ni 5 × 104 na sela / mL ka vakabulabulataki me baleta na 7 na siga ni bera na veivakatovolei. ni oti na 24 na auwa ni veivakabulabulataki, era sa savati na sela 3 na gauna ena PBS ka vakabulabulataki ena veivakabulabulataki e tiko kina na 0.5 mg / ml MTT me baleta e dua tale na 4 na auwa. e dua na Tecan sega ni vakaiyalayala M200 pro dauwiliwili ni peleti ni iyaloyalo (Tecan, Männedorf, Suwitisiladi).
Na kena rawati na sela ni NPs a vakatovolei ena confocal laser vakadidike kei na drodro cytometry vakadidike. kei na incubated me baleta na 4 na auwa. Era a savati na sela 3 na gauna ena PBS ka vakadeitaki ena 4% paraformaldehyde. Siti, Tokio, Japani).Me baleta na vakadidike ni cytometry ni drodro, na vakasama vata ga ni 10 μg / mL galala ni FITC-inisini, FITC-inisini-vakavodoki NPs, kei na NPs ni FITC-inisini ni vakavotukanataki vakawaicalataki era a vakacurumi ki na peleti 96-vinaka seeded vata kei na Hepba h42 ni sela kei na ena 4. vakasucu, era a kau laivi na sela ka savati vaka 3 ena FBS.5 × 104 na sela ena dua na ivakaraitaki era a vakadikevi ena dua na BD LSR II drodro ni cytometer (BD, Franklin drano, Niu Jesi, Amerika).
Na veika kece e vakaraitaki me vaka na kena ibalebale ± ivakatagedegede ni veisau.Na veivakatautauvatataki ena maliwa ni ilawalawa kece e vakatovotovotaki ena kena vakayagataki e dua na sala ANOVA se t-vakatovotovo mai na IBM SPSS iwiliwili 26 me baleta na Mac (IBM, Endicott, Ni'u Ioka, Amerika) kei na p <0.05 a vakasamataki me vaka na iwiliwili bibi.
Na vuli oqo e vakaraitaka na veisau kei na rawa ni vakamamacataki ni spray me vakamamacataka na veitiki ni chitosan / TPP / insulin nanoparticles kei na kena vakavoutaki vinaka cake ni vakatauvatani kei na ivakarau ni vakamamacataki-vakamamacataki ena kena vakayagataki na bulking vakailesilesi se cryoprotectants rawa ka kei na cecere ni icolacola ni veitiki ni insulin e dua na tikitiki ni insulin. e dua na cakacaka ni encapsulation ni 99.4%. mannitol vakaraitaka na lailai duadua na kena ibalebale na levu ni tikitiki kei na cecere duadua ni icolacola ena kena vakavoutaki.Na itovo ni sereki ni NPs kece oqo e vakaraitaka ni ra sa sereki vakatotolo ena iwali ni pH = 2.5 kei na pH = 7, ka tudei sara ena iwali ni pH = 6.5. totolo duadua na sereki. Na kena isau oqo e salavata kei na kena e laurai ena vakatovotovo ni vakatovotovotaki ni sela, me vaka na NPs vakamamacataki ena kena sega na mannitol voleka ni taucoko sara na maroroi ni sela ni vakatovotovotaki ni NPs vou vakarautaki. na fomu ni wainimate sega ni wai, me vaka na wainimate ni gusu se na iyaloyalo ni bioadhesive.
Ena vuku ni veika e baleta na iyau vakavuku, na datasets e buli ka/se vakadikevi ena gauna ni vuli ena gauna oqo e sega ni vakaraitaki raraba, ia e rawa mai vei ira na dauvolavola yadua ena kerekere veiganiti.
Kagan, A. Mataqali 2 matenisuka: itekitekivu ni bula raraba kei na vakasaenisi, leqa vakavuniwai, kei na kena ibalebale vei ira na tauvimate kei na so tale.(McFarlane, 2009).
Na kena vakatorocaketaki na insulin encapsulation: sa rawa beka na veiqaravi ni gusu ena gauna oqo?J. Valenibula.vaniwai ni bula.ivolavola.1, 74-92 (2019).
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR Na toso ni gauna oqo ena ivakarau ni veisoliyaki ni liposome ni insulin-vakavodoki ni gusu me baleta na veiqaravi ni matenisuka.Vakadewataki.J. 549, 201-217 (2018).