Na itukutuku e tiki ni ulutaga ni vakadidike “Vakavinakataki ni veivala ni legumes ki na pathogens kei na manumanu lalai”, raica kece na 5 itukutuku .
Na dauveivakavunau ni mate ni kau ni fungal na mate ni kau (Lib.) de Bary e vakayagataka e dua na iwalewale ni veimataqali me vakaleqa na veimataqali kau ni vulagi. Na vakadidike oqo e vakatura na kena vakayagataki na diamine L-ornithine, e dua na sega ni protein amino asidi ka vakauqeta na synthesis ni amino asidi bibi tale eso, me vaka e dua na iwalewale ni veiliutaki me vakatorocaketaka na isau ni molecule, vakayago kei na biochemical ni Phaseolus vulgaris L. ki na vulavula ni vulavula e vakavuna na Pseudootio. Ena veivakatovolei ni vitro e vakaraitaka ni L-ornithine vakalevu sara na kena vakatabui na tubu ni mycelial ni S. Kuria, e rawa ni vakalailaitaka sara vakalevu na bibi ni vulavula ni moli ena ruku ni ituvaki ni vale katakata. Kuria, L-ornithine vakauqeta na tubu ni veivunikau vakayagataki, ka vakaraitaka ni vakatovolei na vakasama ni L-ornithine e sega ni phytotoxic ki na veivunikau vakayagataki. Me kena ikuri, L-ornithine vakalevutaka na vakaraitaki ni sega ni vakabulabulataki ni veivakabulabulataki (taucoko ni veivakabulabulataki kei na flavonoids) kei na veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki (catalase (CAT), peroxidase (POX), kei na veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki (PPO)), ka vakalevutaka na vakaraitaki ni tolu na veivakabulabulataki-veiwekani na genes, PGRv1). Kuria, ena vakadidike ni silico e vakaraitaka na kena tiko e dua na protein ni oxaloacetate (SsOAH) ena S. (PlOAH) ena vuku ni vakadidike ni cakacaka, vanua maroroi, kei na topology. E taleitaki, na ikuri ni L-ornithine ki na pateta dextrose broth (PDB) veimama vakalailaitaka sara vakalevu na vakaraitaki ni SsOAH gene ena S. Vakakina, na kena vakayagataki na L-ornithine e vakalailaitaka sara vakalevu na kena vakaraitaki na SsOAH na gene ena mycelia ni fungal e kumuni mai na veivunikau e qaravi. Kena itinitini, L-ornithine kerekere vakalevu vakalailaitaka na oxalic asidi ni veivakabulabulataki ena rua na PDB veimama kei na draunikau tauvimate. Me kena itinitini, L-ornithine e dua na itavi bibi ena kena maroroi na ituvaki ni redox ka vakakina na kena vakatorocaketaki na isau ni veitaqomaki ni veivunikau tauvimate. Na veika e rawati mai na vakadidike oqo e rawa ni veivuke ena kena vakatorocaketaki na iwalewale vou, ka sega ni vakacacana na veika bula wavoliti keda me lewai kina na vulavula ni mold ka vakalailaitaka na kena revurevu ena kena teivaki na bini kei na so tale na iteitei.
Na vuvuce vulavula, e vakavuna na manumanu somidi ni manumanu somidi, e dua na mate rerevaki, vakalailaitaka na vuata ka vakavuna e dua na leqa levu ki na buli ni bini (Phaseolus vulgaris L.) e vuravura raraba (Bolton kei na so tale, 2006). Na matetaka e dua vei ira na manumanu somidi dredre duadua ni qele me lewai, kei na dua na rabailevu ni mataivalu ni sivia na 600 na mataqali kau kei na kena rawa ni totolo na macerate na yago ni mataivalu ena dua na ivakarau sega ni vakatabakidua (Liang kei Rollins, 2018). Ena ituvaki sega ni vinaka, e lako curuma e dua na iwase bibi ni nona bula, ka tiko vakatikitiki ena dua na gauna balavu me vaka na roka damudamu, dredre, vaka na sorenikau ka vakatokai na ‘sclerotia’ ena qele se me vaka na vulavula, tubu vulavula ena mycelium se stem pith ni veivunikau e tauvimate (50). S. sclerotiorum e rawa ni bulia na sclerotia, ka rawa kina vua me bula ena vanua e tauvimate ena dua na gauna balavu ka me tudei tikoga ena gauna ni mate (Schwartz kei na so tale, 2005). Na sclerotia e vutuniyau ena kakana, e rawa ni tudei ena qele ena dua na gauna balavu, ka veiqaravi me vaka na inoculum taumada me baleta na veitauvi ni mate e muri (Schwartz kei na so tale, 2005). Ena ituvaki vinaka, na sclerotia e tubu ka vakatubura na manumanu somidi ni cagi ka rawa ni vakacacana na veitiki kece ni kau e cake, oka kina ia e sega ni yalani ki na veisenikau, na draunikau, se na draunikau (Schwartz kei na so tale, 2005).
Na sclerotinia sclerotiorum e vakayagataka e dua na iwalewale ni veimataqali me vakacacana na kena veivunikau ni vakaitikotiko, ka okati kina e dua na veitaravi ni veika e yaco vata mai na tubu ni sclerotial ki na kena vakatorocaketaki na ivakatakilakila. Taumada, na S. Na fungus sa qai vakatubura na oxalic acid, e dua na ka ni veivakacacani, me lewa na pH ni bai ni sela ni kau, vakatorocaketaka na vakacacani ni enzymatic kei na veivakacacani ni yago (Hegedus kei Rimmer, 2005), ka tarova na kena vakacacani na kau ni vulagi. Na iwalewale oqo ni acidification e vakamalumalumutaka na bai ni sela ni kau, ka vakarautaka e dua na vanua vinaka me baleta na kena dau ka vakavinakataki na cakacaka ni bai ni sela ni fungal (CWDEs), ka vakatara na manumanu somidi me vorata na itataqomaki vakayago ka curuma yani na veitiki ni yago (Marciano kei na so tale, 1983). Ni sa curu yani, e dau vakatubura na S. Na toso ni leqa kei na mata ni hyphal e kauta mai na ivakatakilakila ni itovo ni vulavula ni vulavula (Hegedus kei Rimmer, 2005). Ena gauna oqo, na veivunikau ni vulagi era kila na ivakarau ni molecule e salavata kei na pathogen (PAMPs) ena ivakarau ni kilai ni veivakabulabulataki (PRRs), ka vakavuna e dua na veitaravi ni veika e yaco ena sikinala ka qai vakavuna na isau ni veitaqomaki.
Dina ga ni vicasagavulu na yabaki ni sasaga ni kena tarovi na mate, e lailai tikoga na germplasm e veiganiti me vorata na mate ena bean, me vaka ena so tale na iteitei vakabisinisi, ena vuku ni kena vorati, bula, kei na kena rawa ni veisautaki na manumanu somidi. Na kena qaravi na mate e sa rui dredre sara kina ka gadrevi kina e dua na iwalewale ni veivakaduavatataki, e vuqa na kena iwalewale ka oka kina na kena cokovata na ivalavala ni itovo vakavanua, na kena lewai na veika bula, kei na wainimate gaga (O’Sullivan kei na so tale, 2021). Na kena lewai na vulavula ni manumanu somidi ena kemikali e yaga duadua baleta ni fungicides, ni vakayagataki vakadodonu kei na kena gauna dodonu, e rawa ni lewa vinaka na kena tete na mate, vakalailaitaka na bibi ni mate, ka vakalailaitaka na vakayali ni vuata. Ia, na kena vakayagataki vakasivia kei na vakararavi vakasivia ena wainimate gaga e rawa ni vakavuna na kena basika mai na veimataqali manumanu somidi ni S. O koya gona, na kena kunei na veisau ni sala e sega ni vakacacana na veika bula wavoliti keda sa yaco me dua na ka bibi duadua.
Na polyamines (PAs), me vaka na putrescine, spermidine, spermine, kei na cadaverine, e rawa ni veiqaravi me vaka na veisau yalataki me baleta na qele-kauta mai na manumanu somidi ni kau, vakakina na kena vakalailaitaki vakaoti se vakatikina na vakayagataki ni fungicides ni kemikali rerevaki (Nehela kei na so tale., 2024; Yi2 kei na so tale., 24 . Ena veivunikau cecere, PAs era vakaitavi ena vuqa na iwalewale ni yago oka kina, ia e sega ni yalani ki na, wasei ni sela, duidui, kei na isau ni veivakalolomataki ni bula kei na bula (Killiny kei Nehela, 2020). Era rawa ni cakacaka me vaka na antioxidants, veivuke ena kena vakasavasavataki na veimataqali oxygen (ROS), maroroya na redox homeostasis (Nehela kei Killiny, 2023), vakavuna na veitaqomaki-veiwekani (Romero kei na so tale., 2018), vakalawataka na veimataqali sala ni metabolic (Nehela kei Killiny, 2023). Kilini, 2019), tauyavutaka na veisaqasaqa rawati vakailawalawa (SAR), ka vakalawataka na veimaliwai ni kau kei na manumanu somidi (Nehela kei Kilini, 2020; Asija kei na so tale., 2022; Czerwoniec, 2022). E dodonu me da kila ni iwalewale vakatabakidua kei na itavi ni PAs ena veitaqomaki ni kau e duidui me vakatau ena veimataqali kau, pathogens, kei na ituvaki ni vanua e tiko kina. Na PA levu duadua ena veivunikau e biosynthesized mai na poliamine bibi L-ornithine (Killiny kei Nehela, 2020).
L-ornithine e vakaitavi ena vuqa na itavi ena tubu kei na veivakatorocaketaki ni kau. Me kena ivakaraitaki, na vakadidike sa oti e vakaraitaka ni ena raisi (Oryza sativa), na ornithine e rawa ni veiwekani kei na vakayagataki tale ni nitrogen (Liu kei na so tale, 2018), vua ni raisi, vinaka kei na iboi (Lu kei na so tale, 2020), kei na isau ni lomaocaoca ni wai (Yang kei na so tale, 2000). Me kena ikuri, na vakayagataki ni L-ornithine e vakalevutaka sara na vosota ni lauqa ena suka beet (Beta vulgaris) (Hussein kei na so tale, 2019) ka vakalailaitaka na lomaocaoca ni masima ena aniani (Allium Cepa) Roka kei na so tale, 2012). Na itavi rawarawa ni L-ornithine ena veitaqomaki ni lomaocaoca ni bula e rawa ni baleta na kena vakaitavi ena kena kumuni na proline ena veivunikau e qaravi. Me kena ivakaraitaki, na genes e semati ki na proline metabolism, me vaka na ornithine delta aminotransferase (delta-OAT) kei na proline dehydrogenase (ProDH1 kei na ProDH2), sa ripotetaki oti me vakaitavi ena kena taqomaki na Nicotiana benthamiana kei na Arabidopsis thaliana mai na sega ni vakaitikotiko Pse. Maisori, 2012). Ena yasana kadua, e gadrevi na tubu ni manumanu somidi (ODC) me baleta na tubu ni manumanu somidi (Singh kei na so tale., 2020). Taketetaki ODC ni veivakamatenitaki f. sp. lycopersici ena kena vakayagataki na vakanomodi ni gene (HIGS) vakalevutaka sara na kena vorati na vunikau ni tomata ki na Fusarium wilt (Singh kei na so tale., 2020). Ia, na itavi rawa ni vakayagataki ni ornithine exogenous me baleta na veivakalolomataki ni bula me vaka na manumanu somidi e se bera ni vulici vinaka. Na ka bibi cake, na kena revurevu ni ornithine ena kena vorati na mate kei na kena veiwekani kei na veika e yaco ena bula kei na yago e se bera tikoga ni vakadikevi vakalevu.
Na kena kilai na vereverea ni S. sclerotiorum na mate ni legumes e bibi me baleta na kena vakatorocaketaki na iwalewale ni kena lewai vinaka. Ena vakadidike oqo, keitou a kena inaki me keitou kila na itavi rawa ni diamine L-ornithine me vaka e dua na ka bibi ena kena vakatorocaketaki na iwalewale ni veitaqomaki kei na veivala ni veivunikau ni legume ki na mate ni Sclerotinia. Eda vakasamataka ni, me ikuri ni kena vakatorocaketaki na isau ni veitaqomaki ni veivunikau e tauvimate, L-ornithine talega e dua na itavi bibi ena kena maroroi na ituvaki ni redox. Eda vakatura ni rawa ni yaco na L-ornithine e semati ki na kena vakalawataki na iwalewale ni veitaqomaki ni veivakabulabulataki kei na sega ni veivakabulabulataki kei na veivakacacani ki na veivakabulabulataki ni fungal / veivakabulabulataki kei na veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki kei na veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki. Na cakacaka ruarua oqo ni L-ornithine e vakavuna me dua na dauvakaturi yalataki me baleta e dua na iwalewale tudei me vakalailaitaka na kena revurevu ni vulavula ni vulavula ka vakalevutaka na kena vorati na iteitei ni legume raraba ki na manumanu somidi kaukauwa oqo. Na veika e rawati mai na vakadidike oqo e rawa ni veivuke ena kena vakatorocaketaki na iwalewale vou, veimaliwai ni veika bula me lewai kina na vulavula ni mold ka vakalailaitaka na kena revurevu ena kena buli na legume.
Ena vakadidike oqo, e dua na mataqali bini raraba ni bisinisi rawarawa, Giza 3 (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3), a vakayagataki me iyaya ni veivakatovolei. Na sorenikau bulabula e vakarautaka vakayalololoma na Tabana ni Vakadidike ni Legume, Inisitute ni Vakadidike ni Teitei ni Teitei (FCRI), Valenivolavola ni Vakadidike ni Teitei (ARC), Ijipita. E lima na sorenikau era a kaburaki ena tavaya palasitika (na kena rabailevu e loma 35 cm, titobu 50 cm) ka vakasinaiti ena qele e vakacacani ena S. Ena 7–10 na siga ni oti na teitei (DPS), na sorenikau e vakalailaitaki me biu tu ga e rua na sorenikau kei na tubu vakatautauvata kei na tolu na draunikau sa vakarabailevutaki taucoko ena veibilo yadua. Na veivunikau kece e vakasuasuataki vakadua ena veimacawa rua ka vakabulabulataki ena veivula ena ivakarau e vakatututaki me baleta na mataqali e soli.
Me vakarautaki e dua na 500 mg/L vakasama ni L-ornithinediamine (kilai talega me (+)-(S)-2,5-diaminopentanoic asidi; Na iwali ni sitoa e qai vakalailaitaki ka vakayagataki ena veivakatovolei e tarava. Me vakalekalekataki, ono na veitarataravi ni L-ornithine vakasama (12.5, 25, 50, 75, 100, kei na 125 mg/L) a vakatovolei ena vitro. Me kena ikuri, a vakayagataki na wai vakasavasavataki me vaka e dua na lewa ca (Mock) kei na fungicide vakabisinisi "Rizolex-T" 50% wettable pauta (toclofos-methyl 20% + thiram vakayagataki; me vaka e dua na lewa vinaka. Na wainimate ni veivakamatei ni "Rizolex-T" a vakatovolei ena vitro ena lima na vakasama (2, 4, 6, 8 kei na 10 mg/L).
Na ivakaraitaki ni kaukauwa ni bini kei na pods e vakaraitaka na ivakatakilakila ni vulavula ni vulavula (iwiliwili ni kena vakacacani: 10–30%) era a kumuni mai na iteitei vakabisinisi. Dina ga ni levu na iyaya ni kau e tauvimate e laurai ena veimataqali/mataqali (mataqali vakabisinisi rawarawa Giza 3), eso tale, vakabibi o ira era rawati mai na makete ni vanua, era sega ni kilai na veimataqali. Na veika e vakacacani era kumuni era a vakasavasavataki taumada ena dela ni 0.5% na sodium hypochlorite ni iwali me baleta na 3 na miniti, qai vakasavasavataki ena vica na gauna ena wai vakasavasavataki ka savati mamaca ena pepa ni vakasavasavataki vakasavasavataki me kau tani kina na wai e sivia. Na veitiki ni yago e tauvimate era sa qai musuki ki na veitiki lalai mai na yago e loma (ena maliwa ni yago bulabula kei na yago e tauvimate), vakatuburi ena pateta dextrose agar (PDA) veimama ka vakatuburi ena 25 ± 2 °C vata kei na dua na 12 h rarama / 12 h butobuto ni veisau me baleta na 5 siga me vakauqeta na sclerotia . Na iwalewale ni mycelial tip e vakayagataki talega me vakasavasavataki kina na fungal vakatikitikitaki mai na veiwaki se vakacacani ni itovo vakavanua. Na vakasavasavataki ni fungal vakatikitikitaki e a vakatakilai taumada me yavutaki ena kena itovo vakavanua ni itovo vakavanua ka qai vakadeitaki me S. sclerotiorum yavutaki ena veika lalai. Kena itinitini, na veivakasavasavataki kece ni veivakaduiduitaki era a vakatovolei me baleta na veivakacacani ena veivakacacani ni bini raraba Giza 3 me sotava na veivakasama nei Koch.
Me kena ikuri, na kena vakacacani vakalevu duadua na S. sclerotiorum vakatikitikitaki (vakatikitikitaki #3) a vakadeitaki tale yavutaki ena loma ni volavola ni spacer (ITS) na veitarataravi me vaka e vakamacalataka na vulavula kei na so tale., 1990; 2017. Vakalekaleka, era a vakabulabulataki na veivakaduiduitaki ena pateta dextrose broth (PDB) ka vakatuburi ena 25 ± 2 ° C me baleta na 5-7 na siga. Sa qai kumuni na mycelium ni fungal, vakasavasavataki ena isulu ni jisi, savati vakarua ena wai savasava, ka vakamamacataki ena pepa ni vakasavasavataki savasava. Na DNA ni genomic a vakatikitikitaki ena kena vakayagataki na totolo-DNA TM na fungal / manumanu lalai Miniprep iyaya (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah kei na so tale., 2022, 2024). Na kena rDNA na vanua e qai vakalevutaki ena kena vakayagataki na veiwatini ni primer vakatabakidua na kena 1 / kena 4 ( Na iyaya ni PCR vakasavasavataki era a vakau me baleta na kena vakarautaki (Peijing Aoke Dingsheng Co., Ltd.). Na ITS rDNA veitarataravi era a vakarautaki vakarua ena kena vakayagataki na iwalewale ni veitarataravi ni Sanger. Na veitarataravi ni taro era soqoni vata era qai vakatauvatani kei na itukutuku vou duadua ena GenBank kei na Valenivolavola ni Matanitu me baleta na itukutuku ni veika bula (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) ena kena vakayagataki na parokaramu ni komipiuta ni BLASTn. Na veitarataravi ni taro e vakatauvatani kei na 20 tale na S. Na vakadidike ni bula vakaidewadewa e vakayacori ena kena vakayagataki na iwalewale ni kena rawa ni levu duadua kei na ivakaraitaki ni veisautaki ni niukilia ni gauna raraba-vakasukai (Nei kei Kumar, 2000). Na vunikau e cecere duadua na kena rawa ni log-e vakaraitaki. Na vunikau taumada me baleta na vakasaqaqara ni heuristic e digitaki ena kena digitaki na vunikau kei na cecere ni kau-vakasama ena maliwa ni veiwekani-vakaduavatataki (NJ) vunikau (Kumar kei na so tale., 2024) kei na vunikau ni parsimony cecere duadua (MP). Na vunikau ni NJ a tara ena kena vakayagataki e dua na matrix ni yawa ni veiwatini e vakarautaki ena kena vakayagataki na ivakaraitaki raraba ni gauna-vakasukai (Nei kei Kumar, 2000).
Na cakacaka ni veivakamatei ni L-ornithine kei na veivakamatei ni manumanu somidi "Rizolex-T" a vakadeitaki ena vitro ena iwalewale ni veivakabulabulataki ni agar. Iwalewale: Taura na levu veiganiti ni iwali ni sitoa ni L-ornithine (500 mg/L) ka veiwaki vakavinaka sara kei na 10 ml ni PDA ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki me vakarautaki kina na iwali kei na iotioti ni vakasama ni 12.5, 25, 50, 75, 100 kei na 125 mg/L, vakatautauvata. E lima na vakasama ni wainimate ni manumanu somidi “Rizolex-T” (2, 4, 6, 8 kei na 10 mg/L) kei na wai vakasavasavataki sega ni vakacacani e vakayagataki me vaka e dua na kena lewa. Ni oti na veimama sa vakadeitaki, e dua na palasitika vou ni mycelial ni Sclerotinia sclerotiorum itovo vakavanua, 4 mm ena kena rabailevu, a vakadewataki ki na lomadonu ni iyaya ni Petri ka vakabulabulataki ena 25 ± 2 ° C me yacova ni sa ubia na mycelium na kakana ni Petri taucoko ni lewa, ni oti oya sa volai na tubu ni fungal. Vakarautaka na pasede ni vakatabui ni tubu radial ni S.
Na vakatovotovo e a vakayacori vakarua, kei na ono na vakatovotovo ni bula me baleta na ilawalawa yadua ni lewa/vakatovotovo kei na lima na tavaya (rua na kau ena dua na tavaya) me baleta na vakatovotovo ni bula yadua. Na veivakatautauvatataki yadua ni bula e a vakadikevi vakarua (rua na veivakatautauvatataki vakatekinoloji) me vakadeitaka na dodonu, nuitaki kei na reproducibility ni veika e rawati ena veivakatovolei. Me kena ikuri, a vakayagataki na vakadidike ni veivakacacani ni probit me vakarautaki kina na veimama-levu duadua ni veivakacacani ni veivakacacani (IC50) kei na IC99 (Vakatovotovo, 1976).
Me vakalewai na kena rawa ni L-ornithine ena ruku ni ituvaki ni vale ni draunikau, e rua na veivakatovolei ni pot veitaravi e vakayacori. Me vakalekalekataki, era a vakasinaiti na veibilo ena qele qele-oneone sa vakasavasavataki (3:1) ka vakasinaiti ena dua na itovo vakavanua vou ni S. sclerotiorum. Taumada, na isolisoli ni veivakacacani duadua ni S. Va na 5 mm na rabailevu ni agar era sa qai tauri mai na muailiu ka vakacurumi ena 100 g ni dua na veiwaki ni witi kei na raisi bran (1: 1, v / v) kei na flasks kece era a vakasucumi ena 25 ± 2 ° C ena ruku ni dua na 12 h rarama / 12 h butobuto vakauqeta na veisau me baleta na sc 5 . Na veika e tiko ena flasks kece era a veiwaki vinaka me vakadeitaka na homogeneity ni bera ni vakacurumi na qele. Oti, 100 g ni veiwaki ni bran ni koloni e a vakacurumi ki na veibilo yadua me vakadeitaka e dua na vakasama tudei ni manumanu somidi. Na veivanua ni veivakabulabulataki era a vakasuasuataki me vakabulabulataka na tubu ni fungal ka biu ena ituvaki ni vale katakata me baleta na 7 na siga.
E qai kaburaki e lima na sorenikau ni mataqali Giza 3 ena veibilo yadua. Me baleta na veibilo e qaravi ena L-ornithine kei na wainimate ni Rizolex-T, na sorenikau vakasavasavataki era a vakamamacataki taumada me rua na auwa ena dua na iwali ni wai ni rua na veivakaduavatataki kei na dua na iotioti ni IC99 vakasama ni rauta ni 250 mg / L kei na 50 mg / L, vakatautauvata, ka qai cagi-vakamamacataki me baleta e dua na auwa. Ena yasana kadua, na sorenikau era a vakasuasuataki ena wai vakasavasavataki me vaka e dua na lewa ca. Ni oti e 10 na siga, ni bera na imatai ni vakasuasuataki, era sa vakalailaitaki na sorenikau, ka biu tu ga e rua na sorenikau savasava ena veibilo yadua. Me kena ikuri, me vakadeitaki kina na mate ena S. sclerotiorum, na vunikau ni bini ena dua ga na gauna ni veivakatorocaketaki (10 na siga) era a musuki ena rua na vanua duidui ena kena vakayagataki e dua na scalpel vakasavasavataki ka rauta ni 0.5 g ni veiwaki ni bran ni koloni e biu ki na mavoa yadua, ka tarava mai na ituvatuva cecere ni veivakatorocaketaki ni veivakatorocaketaki kece sara. Na veivunikau ni lewa era a mavoa vakatautauvata ka dua na levu tautauvata (0.5 g) ni sterile, sega ni kolonitaki na bran veiwaki e biu ki na mavoa ka maroroi ena ruku ni humidity cecere me vakatotomuria na vanua me baleta na veivakatorocaketaki ni mate ka vakadeitaka na veiganiti ena maliwa ni ilawalawa ni veiqaravi.
Na iwalewale ni veiqaravi: Na sorenikau ni bini e vakasuasuataki ena 500 ml ni dua na iwali ni wai ni L-ornithine (250 mg/l) se na wainimate ni Rizolex-T (50 mg/l) ena kena vakasuasuataki na qele, oti sa qai vakayacori tale na veiqaravi vakatolu ena dua na gauna ni 10 na siga. Na veivakayarayarataki ni placebo-vakabulabulataki era a vakasuasuataki ena 500 ml ni wai vakasavasavataki. Na veiqaravi kece e vakayacori ena ruku ni ituvaki ni vale ni draunikau (25 ± 2°C, 75 ± 1% na ivakarau ni katakata, kei na dua na gauna ni rarama ni 8 h rarama/16 h butobuto). Na veibilo kece era a vakasuasuataki ena veimacawa rua ka qaravi ena veivula ena dua na veivakabulabulataki ni NPK vakatautauvatataki (20-20-20, vata kei na 3.6% na sulifure kei na TE na veika lalai; Zain Seeds, Ijipita) ena dua na vakasama ni 3-4 g / l ena kena vakawaicalataki na foliar me vaka na veivakatutu me baleta na veimataqali kei na dau buli iyaya vakatabakidua. Vakavo ga ke tukuni vakatani, taucoko na vakarabailevutaki na draunikau matua (ikarua kei na ikatolu ni draunikau mai cake) era a kumuni mai na veivakatautauvatataki yadua ni bula ena 72 h ni oti na veiqaravi (hpt), homogenized, pooled ka maroroi ena -80 °C me baleta na vakadidike tale eso oka kina, ia e sega ni vakaiyalayala ki na, ena vanua ni vakasama ni histochemical, kei na veivakabulabulataki sega ni enzymatic kei na vakaraitaki ni gene.
Na kaukauwa ni mate ni vulavula ni vulavula e vakatovotovotaki ena veimacawa 21 na siga ni oti na veivakabulabulataki (dpi) ena kena vakayagataki e dua na ivakarau ni 1-9 (ikuri ni Teveli S2) yavutaki ena ivakarau ni Petzoldt kei Dickson (1996) veisautaki mai vei Teran kei na so tale. (2006). Me vakalekalekataki, na kaukauwa kei na taba ni kau ni bini era a vakadikevi tekivu mai na vanua ni veivakabulabulataki me muria na toso ni mavoa ena veitiki ni yago kei na veitiki ni yago. Na yawa ni leqa mai na vanua ni veivakabulabulataki ki na vanua yawa duadua ena yasa ni vunikau se tabana e qai vakarautaki ka dua na sikoa ni 1-9 e lesi me yavutaki ena vanua ni leqa, na vanua (1) e vakaraitaka ni sega ni dua na mate e laurai volekata na vanua ni veivakabulabulataki kei na (2-9) e vakaraitaka e dua na toso vakamalua ni leqa noppnolong levu (Teveli ni S2). Na kaukauwa ni mate vulavula ni mold a qai veisautaki ki na pasede ena kena vakayagataki na fomula 2:
Me kena ikuri, na vanua ena ruku ni curve ni toso ni mate (AUDPC) a vakarautaki ena kena vakayagataki na ivakarau (Shaner kei Finney, 1977), ka se qai veisautaki walega oqo me baleta na rot vulavula ni bini raraba (Chauhan kei na so tale., 2020) ena kena vakayagataki na ivakarau 3:
Ena vanua e Yi = bibi ni mate ena gauna ti, Yi + 1 = bibi ni mate ena gauna e tarava ti + 1, ti = gauna ni imatai ni veivakatovolei (ena siga), ti + 1 = gauna ni veivakatovolei e tarava (ena siga), n = iwiliwili taucoko ni gauna se vanua ni vakadidike. Na parameters ni tubu ni kau ni bean oka kina na cecere ni kau (cm), iwiliwili ni tabana ena dua na kau, kei na iwiliwili ni draunikau ena dua na kau e volai ena veimacawa me baleta na 21 na siga ena veivakatautauvatataki kece ni bula.
Ena veivakatautauvatataki yadua ni bula, na ivakaraitaki ni draunikau (ikarua kei na ikatolu ni draunikau sa vakatorocaketaki taucoko mai na dela) era a kumuni ena siga 45 ni oti na veiqaravi (15 siga ni oti na iotioti ni veiqaravi). Na veivakatautauvatataki yadua ni bula e tiko kina e lima na tavaya (rua na kau ena dua na tavaya). E rauta ni 500 mg ni yago vakacacani e vakayagataki me baleta na kena kau laivi na roka ni roka (kolorofili a, kolorofili b kei na carotenoids) vakayagataki 80% acetone ena 4 °C ena butobuto. Ni oti na 24 h, na ivakaraitaki era a centrifuged kei na supernatant a vakasoqoni vata me baleta na vakatulewa ni chlorophyll a, chlorophyll b kei na carotenoid na veika e tiko kina ena kena vakayagataki e dua na UV-160A spectrophotometer (Kabani ni Shimadzu, Japani) me vaka na iwalewale ni (ab9ance na duidui ena1). balavu ni galu (A470, A646 y A663 nm). Kena itinitini, na lewe ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki e vakarautaki ena kena vakayagataki na fomula oqo 4-6 e vakamacalataka o Lichtenthaler (1987).
Ena 72 h ni oti na veiqaravi (hpt), na draunikau (ikarua kei na ikatolu ni draunikau taucoko ni vakatorocaketaki mai na dela) era a kumuni mai na veivakatautauvatataki yadua ni bula me baleta na vanua ni histokemikali ni vanua ni waigaga (H2O2) kei na anion ni waigaga (O2•−). Na veivakatautauvatataki yadua ni bula e tiko kina e lima na tavaya (rua na kau ena dua na tavaya). Na veivakatautauvatataki yadua ni bula e vakadikevi ena veivakatautauvatataki (rua na veivakatautauvatataki vakatekinoloji) me vakadeitaka na dodonu, nuitaki kei na reproducibility ni iwalewale. H2O2 kei na O2•− era a vakadeitaki ena kena vakayagataki na 0.1% 3,3 '-diaminobenzidine (DAB; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jamani) se nitroblue tetrazolium (NBT; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jamani), vakatautauvata, muria na iwalewale e vakamacalataka na al-P. (2004) kei Atama kei na so tale. (1989) kei na veisau lalai. Me baleta na vanua ni H2O2 ena vanua, era a vakasinaiti na draunipepa ena 0.1% DAB ena 10 mM Tris buffer (pH 7.8) ka qai vakatuburi ena ivakarau ni katakata ni rumu ena rarama me baleta na 60 na miniti. Era a vakabulabulataki na draunipepa ena 0.15% (v/v) TCA ena 4: 1 (v/v) ethanol: chloroform (Al-Gomhoria wainimate kei na iyaya ni veiqaravi vakavuniwai, Cairo, Ijipita) ka qai vakaraitaki ki na rarama me yacova ni ra sa butobuto. Vakakina, na valves era a vakasinaiti ena 10 mM potasiumi fosfate buffer (pH 7.8) e tiko kina na 0.1 w / v% HBT me baleta na vanua ni histokemikali ni O2•− ena vanua. Na draunipepa era a vakatuburi ena rarama ena ivakarau ni katakata ni rumu me baleta na 20 min, qai vakalivalivataki me vaka e cake, ka qai vakararamataki me yacova ni sa basika mai na vanua butobuto karakarawa/violet. Na kaukauwa ni roka karakarawa (me vaka e dua na ivakatakilakila ni H2O2) se karakarawa-violet (me vaka e dua na ivakatakilakila ni O2•−) e vakatovotovotaki ena kena vakayagataki na vakadewa vaka-Viti ni pakete ni veiqaravi ni iyaloyalo ImageJ (http://fiji.sc; rawati ena 7 Maji 2024).
Na malundialdehyde (MDA; me vaka e dua na ivakatakilakila ni lipid peroxidation) a vakadeitaki me vaka na iwalewale ni Du kei Bramlage (1992) kei na veisau lailai. Na draunikau mai na veivakatautauvatataki yadua ni bula (ikarua kei na ikatolu ni draunikau sa vakatorocaketaki taucoko mai na dela) era a kumuni 72 h ni oti na veiqaravi (hpt). Na veivakatautauvatataki yadua ni bula e okati kina e lima na tavaya (rua na kau ena dua na tavaya). Na veivakatautauvatataki yadua ni bula e vakadikevi ena veivakatautauvatataki (rua na veivakatautauvatataki vakatekinoloji) me vakadeitaka na dodonu, nuitaki kei na reproducibility ni iwalewale. Vakalekaleka, 0.5 g ni qele draunikau ni yago a vakayagataki me baleta na MDA lavetaki vata kei na 20% trichloroacetic asidi (TCA; MilliporeSigma, Burlington, MA, Amerika) e tiko kina na 0.01% butylated hydroxytoluene (BHT; Sigma-Aldrich, St. Na MDA na lewena ena veivakabulabulataki a qai vakadeitaki ena kena vakarautaki na veivakabulabulataki ena 532 kei na 600 nm ena kena vakayagataki e dua na UV-160A na veivakasarasarataki (Kabani ni Shimadzu, Japani) ka qai vakaraitaki me vaka na nmol g-1 FW.
Me baleta na vakatovotovotaki ni sega ni vakabulabulataki kei na vakabulabulataki, na draunikau (ikarua kei na ikatolu ni draunikau taucoko ni vakatorocaketaki mai na dela) era a kumuni mai na veivakatautauvatataki yadua ni bula ena 72 h ni oti na veiqaravi (hpt). Na veivakatautauvatataki yadua ni bula e tiko kina e lima na tavaya (rua na kau ena dua na tavaya). Na ivakaraitaki yadua ni bula e vakadikevi ena rua na ivakaraitaki (rua na ivakaraitaki vakatekinoloji). E rua na draunikau era a vakamamacataki ena wai ni nitrogen ka vakayagataki vakadodonu me baleta na vakatulewa ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki kei na sega ni veivakabulabulataki, na iwiliwili taucoko ni amino asidi, na proline na lewena, na ivakaraitaki ni gene, kei na oxalate vakalevutaki.
Na iwiliwili taucoko ni phenolics vakawaicalataki a vakadeitaki ena kena vakayagataki na Folin-Ciocalteu reagent (Sigma-Aldrich, St. (1999). Me vakalekalekataki, e rauta ni 0.1 g ni liga ni draunikau vakatautauvatataki e a lavetaki vata kei na 20 ml 80% methanol ena butobuto me baleta na 24 h ka a kumuni na wai ni oti na kena vakasavasavataki. 0.1 ml ni ivakaraitaki ni vakasaqa e veiwaki vata kei na 0.5 ml Folin-Ciocalteu reagent (10%), luluqa me baleta na 30 s ka biu tu ena butobuto me baleta na 5 min. Sa qai 0.5 ml ni 20% sodium carbonate iwali (Na2CO3; Al-Gomhoria veiqaravi vakavuniwai kei na veiqaravi vakavuniwai ni kabani, Cairo, Ijipita) a vakacurumi ki na tube yadua, veiwaki vinaka ka vakatubura ena ivakarau ni katakata ni rumu ena butobuto me baleta na 1 h. Ni oti na veivakabulabulataki, na absorbance ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki e vakarautaki ena 765 nm ena kena vakayagataki e dua na UV-160A na veivakabulabulataki (Kabani ni Shimadzu, Japani). Na vakasama ni taucoko ni phenols vakawaicalataka ena ivakaraitaki ni veivakabulabulataki a vakadeitaki ena kena vakayagataki e dua na curve ni veivakatautauvatataki ni asidi ni gallic (qoli vakasaenisi, Hampton, NH, Amerika) ka vakaraitaki me vaka na milikaramu ni gallic asidi tautauvata ena dua na karamu ni bibi vou (mg GAE g-1 bibi vou).
Na iwiliwili taucoko ni flavonoid vakawaicalataki e vakadeitaki me vaka na iwalewale ni Djeridane kei na so tale. (2006) kei na veisau lailai. Vakalekaleka, 0.3 ml ni methanol e cake e a veiwaki vata kei na 0.3 ml ni 5% aluminium chloride iwali (AlCl3; Fisher vakasaenisi, Hampton, NH, Amerika), kaukauwa vakauqeti ka qai vakatuburi ena ivakarau ni katakata ni rumu me baleta na 5 min, ka tarava mai na ikuri ni mssiumta10. (Al-Gomhoria wainimate kei na iyaya ni veiqaravi vakavuniwai, Cairo, Ijipita), vakavinaka sara na veiwaki kei na incubated ena ivakarau ni katakata ni rumu me baleta na 30 min ena butobuto. Ni oti na veivakabulabulataki, na absorbance ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki e vakarautaki ena 430 nm ena kena vakayagataki e dua na UV-160A na veivakabulabulataki (Kabani ni Shimadzu, Japani). Na vakasama ni taucoko ni flavonoids vakawaicalataki ena ivakaraitaki ni vakasukai a vakadeitaki ena kena vakayagataki e dua na rutin vakatautauvatataki ni curve (TCI Amerika, Portland, SE, Amerika) ka qai vakaraitaki me vaka na milikaramu ni rutin tautauvata ena dua na karamu ni bibi vou (mg RE g-1 bibi vou).
Na iwiliwili taucoko ni amino asidi galala ni drauni bini a vakadeitaki ena kena vakayagataki e dua na veisautaki ni ninhydrin reagent (Thermo vakasaenisi ni kemikali, Waltham, MA, Amerika) yavutaki ena iwalewale e vakatura o Yokoyama kei Hiramatsu (2003) ka veisautaki mai na Sun et al. (2006). Vakalekaleka, 0.1 g ni yago ni qele a lavetaki vata kei na pH 5.4 buffer, kei na 200 μL ni supernatant a vakayacori vata kei na 200 μL ni ninhydrin (2%) kei na 200 μL ni pyridine (10%; vakarautaki ena 580 nm ena kena vakayagataki e dua na ivakarau ni UV-160A (Kabani ni Shimadzu, Japani). Ena yasana kadua, a vakadeitaki na proline ena iwalewale ni Bates (Bates kei na so tale, 1973). Proline a lavetaki vata kei na 3% sulfosalicylic asidi (Thermo vakasaenisi ni kemikali, Waltham, MA, Amerika) kei na oti na centrifugation, 0.5 ml ni supernatant a veiwaki vata kei na 1 ml na asidi ni aisi (Fisher vakasaenisi, Hampton, NH, Amerika) kei na ninhydrin reagent ena ena 520 nm vakayagataka na ivakarau ni vakaraitaki vata ga me vaka e cake. Na iwiliwili taucoko ni galala ni amino asidi kei na proline ena draunikau vakavotukanataki ena kena vakayagataki na glycine kei na proline vakatautauvatataki ni curves (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Amerika), vakatautauvata, ka vakaraitaki me vaka na mg / g na bibi vou.
Me vakadeitaka na cakacaka ni enzymatic ni antioxidant enzymes, rauta ni 500 mg ni homogenized na yago a lavetaki vata kei na 3 ml ni 50 mM Tris buffer (pH 7.8) e tiko kina na 1 mM EDTA-Na2 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika), vakasavasavataki ena 10,000 × g me baleta na 20 min ena ruku ni vakacegu (4 ° C), kei na supernatant (vakacacani ni enzyme kaukauwa) a vakasoqoni vata (El-Nagar kei na so tale, 2023; Osman kei na so tale, 2023). Catalase (CAT) a qai vakayacori vata kei na 2 ml ni 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.5; Sigma-Aldrich, St. 2023; Osimani kei na so tale, 2023). Na cakacaka ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki (POX) e vakadeitaki ena kena vakayagataki na iwalewale ni Harrach kei na so tale. (2009). (2008) kei na veisau lalai (El-Nagar kei na so tale., 2023; Osman kei na so tale., 2023) kei na cakacaka ni enzymatic ni polyphenol oxidase (PPO) a vakadeitaki ni oti na kena saumi vata kei na 2.2 ml ni 100 mM sodium phosphate buffer (pH 6.0l). Portland, OR, Amerika) kei na 100 μl ni 12 mM H2O2. Na iwalewale e a veisautaki vakalailai mai (El-Nagar kei na so tale, 2023; Osman kei na so tale, 2023). Na assay a vakayacori ni oti na kena saumi vata kei na 3 ml ni iwali ni katekoli (Thermo vakasaenisi ni kemikali, Waltham, MA, Amerika) (0.01 M) vou vakarautaki ena 0.1 M phosphate buffer (pH 6.0). Na cakacaka ni CAT a vakarautaki ena kena dikevi na kena vakacacani na H2O2 ena 240 nm (A240), na cakacaka ni POX a vakarautaki ena kena dikevi na tubu ni absorbance ena 436 nm (A436), kei na cakacaka ni PPO a vakarautaki ena kena volai na veisau ni absorbance ena 495 nm kece na U300 vakaraitaki ni rarama (Simadzu, Japani).
A vakayagataki na RT-PCR ena gauna dina me kunei kina na ivakatagedegede ni volavola ni tolu na genes e baleta na antioxidant, oka kina na catalase ni peroxisomal (PvCAT1; Naba ni icurucuru ni GenBank). Naba ni curu KY195009.1), ena draunikau ni bini (na ikarua kei na ikatolu ni draunikau sa vakatorocaketaki taucoko mai na dela ni) 72 h ni oti na iotioti ni veiqaravi. Me vakalekalekataki, a vakatikitikitaki na RNA ena kena vakayagataki na P taucoko ni RNA ni lavetaki ni iyaya (Cat. Naba BSC52S1; BioFlux, Biori tekinolaji, Jaina) me vaka na ivakarau ni dau buli iyaya. Oti, a vakayagataki na cDNA ena kena vakayagataki na TOP volavola TM cDNA vakarautaki ni iyaya me vaka na veidusimaki ni dau buli iyaya. Na veitarataravi ni primer ni tolu na genes e cake e volai tu ena ikuri ni Teveli S3. PvActin-3 (GenBank naba ni curu: XM_068616709.1) a vakayagataki me vaka na gene ni vale kei na veiwekani ni gene vakaraitaka na kena vakayagataki na iwalewale ni 2-ΔΔCT (Livak kei Schmittgen, 2001). Na tudei ni actin ena ruku ni lomaocaoca ni bula (sega ni veiganiti na veimaliwai ena maliwa ni legumes raraba kei na manumanu somidi ni manumanu) kei na lomaocaoca ni bula (dravuisiga, masima, lailai ni katakata) a vakaraitaki (Borges kei na so tale., 2012).
Eda a vakayacora taumada e dua na genome-rabailevu ena vakadidike ni silico ni oxaloacetate acetylhydrolase (OAH) na protein ena S. Vakalekaleka, keitou vakayagataka na OAH mai na Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; taxide: 1191702; naba ni curu ki na GenBank XP_040799428.1; 316 na asidi amino) me vaka na veitarataravi ni taro me mapetaki kina na protein vakatautauvata ena S. A vakayacori na BLASTp me baleta na itukutuku ni genome ni S.
Me kena ikuri, na ivakatakilakila ni OAH mai na S. ivakaraitaki (Joni kei na so tale, 1992). Na vunikau ni phylogenetic a cokovata kei na vakadidike ni veitarataravi ni veitarataravi ni veitarataravi ni protein ni veitarataravi ni OAH kece sara e parofisaitaki (SsOAH) mai na S. kei na 2007). Me kena ikuri, na veitarataravi ni amino acid vinaka duadua ni SsOAH mai na S. iyaya ni cakacaka ni ESPript (ivakarau ni 3.0;
Kuria, na vanua ni mata ni cakacaka e parofisaitaki kei na vanua maroroi ni S. Kena itinitini, e tolu na ivakarau (3D) na ituvatuva ni ivakaraitaki ni parofisaitaki S. 2015) ka vakadeitaki ena kena vakayagataki na dauveiqaravi ni Suwitisi-iVakaraitaki (Biasini kei na so tale, 2014). Na veivakatorocaketaki ni tolu na veitikina e parofisaitaki (PDB ivakarau) era a vakaraitaki ena veitaratara ena kena vakayagataki na pakete ni UCSF-Chimera (ivakarau 1.15; ) (Pettersen kei na so tale, 2004).
Na ivakarau ni gauna dina ni fluorescence PCR a vakayagataki me vakadeitaka na ivakatagedegede ni volavola ni oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH; naba ni curu ki na GenBank: XM_001590428.1) ena mycelia ni Sclerotinia sclerotiorum. Me vakalekalekataki, a vakacurumi na S. Ni oti oya, era a qaravi na sela ena L-ornithine kei na wainimate ni Rizolex-T ena iotioti ni IC50 vakasama (rauta ni 40 kei na 3.2 mg / L, vakatautauvata) ka qai vakabulabulataki me baleta e dua tale na 24 h ena ruku ni ituvaki vata ga. Ni oti na vakasucu, na itovo vakavanua era a vakasavasavataki ena 2500 rpm me baleta na 5 min kei na vakasaqa (mycelium ni fungal) a vakasoqoni vata me baleta na vakadidike ni vakaraitaki ni gene. Vakakina, na fungal na mycelium a kumuni ena 0, 24, 48, 72, 96, kei na 120 h ni oti na mate mai na veivunikau e tauvimate ka sa bulia na vulavula ni moli kei na cottony na mycelium ena dela ni veitiki ni yago e tauvimate. E a lavetaki na RNA mai na mycelium ni fungal ka qai vakarautaki na cDNA me vaka e vakamacalataki mai cake. Na veitarataravi ni primer me baleta na SsOAH e volai tu ena ikuri ni teveli S3. SsActin (na naba ni curu ni GenBank: XM_001589919.1) a vakayagataki me vaka na gene ni vale, kei na veiwekani ni gene vakaraitaka na kena vakayagataki na iwalewale ni 2-ΔΔCT (Livak kei Schmittgen, 2001).
Na oxalic acid e vakadeitaki ena pateta dextrose broth (PDB) kei na ivakaraitaki ni kau e tiko kina na manumanu somidi ni manumanu somidi me vaka na iwalewale ni Xu kei Zhang (2000) kei na veisau lailai. Me vakalekalekataki, S. Ni oti na vakasucu, na itovo vakavanua ni fungal a taumada ni vakasavasavataki ena Whatman # 1 pepa ni vakasavasavataki ka qai vakasavasavataki ena 2500 rpm me baleta na 5 min me kau laivi na mycelium sa vo. Na wai e cake e a kumuni ka maroroi ena 4°C me baleta na kena vakadeitaki tale na levu ni oxalate. Me baleta na vakarautaki ni ivakaraitaki ni kau, rauta ni 0.1 g ni tikitiki ni yago ni kau era a kau tani vakatolu ena wai distilled (2 ml ena veigauna yadua). Na ivakaraitaki era sa qai vakasavasavataki ena 2500 rpm me baleta na 5 min, na supernatant sa mamaca vakasavasavataki ena Whatman naba 1 pepa ni vakasavasavataki ka kumuni me baleta na vakadidike tale eso.
Me baleta na vakadidike vakailavo ni oxalic asidi, na veiwaki ni veivakacacani a vakarautaki ena dua na bilo stoppered tube ena ituvatuva oqo: 0.2 ml ni ivakaraitaki (se PDB itovo vakavanua filtrate se oxalic asidi ivakatagedegede ni iwali), 0.11 ml ni bromophenol karakarawa (BPB, 1 mM; asidi (H2SO4; Al-Gomhoria veiqaravi vakavuniwai kei na iyaya vakavuniwai, Cairo, Ijipita) kei na 0.176 ml ni 100 mM potasiumi dichromate (K2Cr2O7; TCI kemikali, portland, se, Amerika), ka qai vakawaicalataka na iwali ki na 4.8 ml ni wai kei na 4.8 ml ena dua na wai 60 °C. Ni oti na 10 min, a tarova na kena isau ena kena vakacurumi na 0.5 ml ni wai ni sodium (NaOH; 0.75 M). Na absorbance (A600) ni veiwaki ni veivakacacani a vakarautaki ena 600 nm ena kena vakayagataki e dua na UV-160 na ivakarau ni vakadidike (Kabani ni Shimadzu, Japani). PDB kei na wai vakasavasavataki era vakayagataki me vaka na lewa me baleta na kena vakarautaki na filtrates ni itovo vakavanua kei na ivakaraitaki ni kau, vakatautauvata. Na oxalic acid vakasama ena itovo vakavanua filtrates, vakaraitaki me vaka na oxalic asidi ena dua na mililita ni PDB veimama (μg.mL-1), kei na draunikau lavelavetaki, vakaraitaki me vaka na micrograms ni oxalic asidi ena dua na karamu ni bibi vou (μg.g-1 FW), a vakadeitaki ena kena vakayagataki e dua na oxalic acid calibration, MA, Amerika).
Ena loma taucoko ni vuli, na veivakatovolei kece era a vakarautaki ena dua na ituvatuva taucoko ni randomized (CRD) vata kei na ono na veivakatautauvatataki ni bula ena dua na veiqaravi kei na lima na tavaya ena dua na tavaya ni bula (rua na kau ena dua na tavaya) vakavo ga ke tukuni vakatani. Na veivakatautauvatataki ni bula e vakadikevi ena veivakatautauvatataki (rua na veivakatautauvatataki vakatekinoloji). Na veivakatautauvatataki vakatekinoloji e vakayagataki me dikevi kina na reproducibility ni veivakatovolei vata ga ia e sega ni vakayagataki ena vakadidike ni iwiliwili me kakua kina na veivakatautauvatataki lasu. Na itukutuku era a vakatovotovotaki vakailavo ena kena vakayagataki na vakadidike ni veisau (ANOVA) ka tarava mai na Tukey-Kramer dina bibi na duidui (HSD) vakatovotovo (p ≤ 0.05). Me baleta na veivakatovolei ena vitro, IC50 kei na IC99 na isau e vakarautaki ena kena vakayagataki na ivakaraitaki ni probit kei na 95% na gauna ni vakanuinui e vakarautaki.
E va taucoko na manumanu somidi era a kumuni mai na veimataqali iteitei ni soya ena yasana o El Ghabiya, e Ijipita. Ena PDA ni veimama, na veivakaduiduitaki kece e vakavuna na mycelium vulavula kirimu ka totolo sara na kena vulavula cottony (iTaba 1A) ka qai beige se karakarawa ena gauna ni sclerotium. Na sclerotia e dau kaukauwa, karakarawa, vakababa se sega ni veiganiti na kena irairai, 5.2 ki na 7.7 na milimita na kena balavu ka 3.4 ki na 5.3 na milimita na kena rabailevu (iTaba 1B). E dina ga ni va na veivakaduiduitaki e vakatorocaketaka e dua na ivakarau ni veivakaduiduitaki ena bati ni veivakaduiduitaki ni oti na 10-12 na siga ni veivakabulabulataki ena 25 ± 2 °C (iVakaraitaki. 1A), na iwiliwili ni veivakaduiduitaki ena dua na peleti e duidui sara vakalevu ena kedra maliwa (P <0.001). 1.53 na peleti; Vakakina, na vakatikitikitaki #3 e vakavuna e levu cake na asidi ni oxalic ena PDB mai na veivakaduiduitaki tale eso (3.33 ± 0.49 μg.mL-1; iVakatakarakara 1D). Na isolate #3 e vakaraitaka na ivakarau ni bula kei na ivakarau ni manumanu lalai ni manumanu somidi ni manumanu somidi. Me kena ivakaraitaki, ena PDA, koloni ni vakatikitikitaki #3 tubu totolo, era vulavula kirimu (iTaba 1A), vakasuka na beige se rarama ni samani dromodromo-karakarawa, ka gadrevi kina na 6-7 na siga ena 25 ± 2 ° C me ubia taucoko na dela ni dua na peleti ni 9 cm na kena rabailevu. Me vaka na ivakarau ni yago kei na ivakarau ni yago e cake, na isolisoli #3 e vakatakilakilataki me vaka na Sclerotinia sclerotiorum.
Itaba 1. Na itovo kei na kena dau vakavuna na mate ni S. (A) Na tubu ni mycelial ni va na S. sclerotiorum vakatikitikitaki ena PDA ni veivakaduiduitaki, (B) na veivakaduiduitaki ni va na S. rawarawa na kena teivaki na legume vakabisinisi Giza 3 ena ruku ni ituvaki ni vale katakata. Na veika e vakaraitaka na kena ibalebale ± SD ni lima na veivakatautauvatataki ni bula (n = 5). Na ivola duidui e vakaraitaka na duidui bibi ni iwiliwili ena maliwa ni veiqaravi (p <0.05). (F-H) Na ivakatakilakila ni vulavula ni kaukauwa e basika ena veitiki ni qele kei na siliques, vakatautauvata, 10 na siga ni oti na veivakabulabulataki kei na vakatikitikitaki #3 (dpi). (I) Na vakadidike ni bula vakaidewadewa ni loma ni volavola ni spacer (ITS) na vanua ni S. sclerotiorum vakatikitikitaki #3 a vakayacori ena kena vakayagataki na iwalewale ni kena rawa ni levu duadua ka vakatauvatani kei na 20 vakatikitikitaki ni veidusimaki / veimataqali e rawati mai na itukutuku ni matanitu me baleta na itukutuku ni tekinolaji ni bula (NCBI). Na naba e cake ni laini ni veisoqoni e vakaraitaka na vanua e kovuta (%), kei na naba e ra ni laini ni veisoqoni e vakaraitaka na balavu ni tabana.
Kuria, me vakadeitaka na mate, e va na S. sclerotiorum e rawati e vakayagataki me vakabulabulataki kina na veimataqali bini vakabisinisi rawarawa Giza 3 ena ruku ni ituvaki ni vale katakata, ka sa salavata kei na veivakadeitaki nei Koch (iVakaraitaki. 1E). E dina ga ni veivakaduiduitaki kece ni fungal era rawati ka rawa ni vakacacana na bini drokadroka (cv. Giza 3), ka vakavuna na ivakatakilakila ni vulavula ni moli ena veitiki kece e cake-qele (iVakaraitaki 1F), vakabibi ena veivunikau (iVakaraitaki. isolate kaukauwa ena rua na veivakatovolei tudei. Na isolisoli 3 e tiko kina na bibi duadua ni mate (%) ena veivunikau ni bini (24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, kei na 76.7 ± 3.1 ena 7, 14, kei na 21 na siga ni oti na mate, vakatautauvata; itaba 1F).
Na kena kilai na veivakacacani duadua ni S. sclerotiorum vakatikitikitaki #3 a vakadeitaki tale yavutaki ena loma ni volavola ni spacer (ITS) na veitarataravi (iVakatakarakara. 1I). Na vakadidike ni phylogenetic ena maliwa ni veivakaduiduitaki #3 kei na 20 na veivakaduiduitaki ni veidusimaki/mataqali e vakaraitaka na tautauvata cecere (> 99%) ena kedrau maliwa. E dodonu me da kila ni S. OR206374.1; 548 bp), ka vakavuna na rusa ni vunikau (Matthiola incana), ka ra sa vakailawalawataki kece vakatikitiki ena dela ni draunikau (iTaba 1I). Na veitarataravi vou sa biu tu ena itukutuku ni NCBI ka vakatokai me "Sclerotinia sclerotiorum - vakatikitikitaki YN-25" (na naba ni curu ki na GenBank PV202792). E rawa ni laurai ni isolisoli 3 e isolisoli ni veivakacacani duadua; o koya gona, na isolate oqo e digitaki me baleta na vuli ena veivakatovolei kece e tarava.
Na cakacaka ni antibacterial ni diamine L-ornithine (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Jamani) ena veimataqali vakasama (12.5, 25, 50, 75, 100 kei na 125 mg/L) me baleta na S. E vakasakiti ni L-ornithine e vakayagataka e dua na kena revurevu ni veivakabulabulataki ka vakamalumalumutaka vakamalua na tubu ni radial ni S. Ena vakasama cecere duadua e vakatovolei (125 mg/L), L-ornithine vakaraitaka na cecere duadua ni mycelial tubu ni vakatabui ni iwiliwili (99.62 ± 0.27%; itaba 2B), ka sa tautauvata kei na fungicide vakabisinisi Rizolex-T (vakasama cecere duadua 99.45 ± 3% na iwiliwili ni vakatabui ni 99.45%; (10 mg/L), e vakaraitaka na kena yaga tautauvata.
itaba 2. Ena vitro ni veivakabulabulataki ni L-ornithine me baleta na veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki. (A) Veivakatauvatani ni cakacaka ni veivakabulabulataki ni veimataqali vakasama ni L-ornithine me baleta na S. (B, C) Na ivakarau ni vakatabui (%) ni S. Na veika e vakaraitaka na kena ibalebale ± SD ni lima na veivakatautauvatataki ni bula (n = 5). Na ivola duidui e vakaraitaka na duidui ni iwiliwili ena maliwa ni veiqaravi (p <0.05). (D, E) Na ivakaraitaki ni probit ni vakadidike ni L-ornithine kei na wainimate ni veivakamatei ni Rizolex-T, vakatautauvata. Na laini ni regression ni ivakaraitaki ni probit e vakaraitaki me vaka e dua na laini karakarawa kaukauwa, kei na gauna ni vakanuinui (95%) e vakaraitaki me vaka e dua na laini damudamu dashed.
Me kena ikuri, a vakayacori na vakadidike ni regression ni probit ka vakaraitaki na veitiki ni qele veiganiti ena Teveli 1 kei na itaba 2D, E. Me vakalekalekataki, na isau ni slope ciqomi (y = 2.92x - 4.67) kei na iwiliwili bibi e salavata mai (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 kei na p <0.0001; itaba 2D) ni L-ornithine e vakaraitaka e dua na veivakatorocaketaki ni S. (y = 1,96x - 0,99, Cox & Snell R2 = 0,1242, R2 = 0,1708 y p <0,0001) (Teveli 1).
Teveli 1. Na isau ni veimama-levu duadua ni veivakabulabulataki ni vakasama (IC50) kei na IC99 (mg / l) ni L-ornithine kei na wainimate ni veivakamatei ni "Rizolex-T" me baleta na S.
Me kena ikuri, L-ornithine (250 mg / L) vakalailaitaka sara vakalevu na kena vakatorocaketaki kei na bibi ni vulavula ni vulavula ena veiqaravi ni veivunikau ni bini raraba ni vakatauvatani kei na veivunikau ni S. Me vakalekalekataki, e dina ga ni bibi ni mate ni sega ni qaravi na veivunikau ni lewa ni tauvimate e tubu vakamalua (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, kei na 92.33 ± 3.06%), L-ornithine vakalailaitaka sara vakalevu na bibi ni mate (%) ena loma taucoko ni veivakatovolei (8.0 ± 0,0). 1.00, kei na 26.36 ± 3.07) ena 7, 14, kei na 21 na siga ni oti na veiqaravi (dpt), vakatautauvata (itaba 3A). Vakakina, ni sa vakayagataki na S. 183,61 ± 7,71; itaba 3B). Na ivakarau vata ga oqo e laurai ena ikarua ni veivakatovolei.
Na kena revurevu ni kena vakayagataki na L-ornithine ena kena vakatorocaketaki na roka vulavula ni bini raraba e vakavuna na Sclerotinia sclerotiorum ena ruku ni ituvaki ni vale katakata. (A) Na mate ni toso ni curve ni vulavula ni moli ni bini raraba ni oti na veiqaravi ena 250 mg / L L-ornithine. (B) Vanua ena ruku ni mate ni toso ni curve (AUDPC) ni vulavula ni moli ni bini raraba ni oti na veiqaravi ena L-ornithine. Na veika e vakaraitaka na kena ibalebale ± SD ni lima na veivakatautauvatataki ni bula (n = 5). Na matanivola duidui e vakaraitaka na duidui bibi ni iwiliwili ena maliwa ni veiqaravi (p <0.05).
Na vakayagataki ni 250 mg/L L-ornithine e vakalevutaka vakamalua na cecere ni kau (iVakaraitaki 4A), iwiliwili ni tabana ena dua na kau (iVakaraitaki 4B), kei na iwiliwili ni draunikau ena dua na kau (iVakaraitaki 4C) ni oti e 42 na siga. Ni sa levu duadua na kena revurevu ena veivakarautaki kece ni kakana e vulici, na vakayagataki ni exogenous ni 250 mg/L L-ornithine e ikarua ni kena revurevu levu duadua ni vakatauvatani kei na kena lewa sega ni vakayagataki (iVakaraitaki. 4A-C). Ena yasana kadua, na veiqaravi ni L-ornithine e sega ni dua na kena revurevu bibi ena veika e tiko ena veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki (iVakaraitaki 4D) kei na veivakabulabulataki b (iVakaraitaki 4E), ia e vakalevutaka vakalailai na iwiliwili taucoko ni carotenoid (0.56 ± 0.03 mg2 ± 0 mg2 fr wt kei na lewa ca (0.00). lewa vinaka (0,46 ± 0,02 mg / g fr bibi; itaba. 4F). Me kena ikuri, na veika oqo e vakaraitaka ni L-ornithine e sega ni phytotoxic ki na veivunikau e qaravi ka rawa sara mada ga ni vakavuna na nodra tubu.
Na kena revurevu ni kena vakayagataki na L-ornithine ena ivakarau ni tubu kei na roka ni draunikau ni bini e tauvi ira na Sclerotinia sclerotiorum ena ruku ni ituvaki ni vale katakata. (A) Na cecere ni kau (cm), (B) Na iwiliwili ni tabana ena dua na kau, (C) Na iwiliwili ni draunikau ena dua na kau, (D) Na lewe ni kolorofili a (mg g-1 na kena bibi), (E) Na lewe ni kolorofili b (mg g-1 na kena levu), (F) Na iwiliwili taucoko ni carotenoid (mg g-1 na kena levu). Na isau ni kena ibalebale ± SD ni lima na veivakatautauvatataki ni bula (n = 5). Na ivola duidui e vakaraitaka na duidui bibi ni iwiliwili ena maliwa ni veiqaravi (p <0.05).
Ena vanua ni histochemical ni veivanua ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki ni veivakabulabulataki (ROS; vakaraitaki me vaka na haidrojini peroxide [H2O2]) kei na radicals galala (vakaraitaki me vaka na anions superoxide [O2•−]) e vakaraitaka ni vakayagataki ni exogenous ni L-ornithine (250 mg/L) e vakalailaitaka sara vakalevu na kena kumuni na H2O2 5A) kei na O2•- (32,69 ± 8,56 nmol.g-1 FW; iVakaraitaki 5B) vakatauvatani kei na kena kumuni na veivunikau sega ni vakayagataki ruarua (173,31 ± 12,06 kei na 149,35 ± 7,06 nmol. 170,12 ± 9,50 kei na 157,00 ± 7,81 nmol.g -1 fr wt, vakatautauvata) ena 72 h. Na ivakatagedegede cecere ni H2O2 kei na O2•− kumuni ena ruku ni hpt (iVakaraitaki 5A, B). Vakakina, na TCA-yavutaki na malondialdehyde (MDA) vakatovotovo e vakaraitaka ni S. Ia, na kena vakayagataki na L-ornithine e vakalailaitaka sara vakalevu na kena vakacacani na lipid me vaka e vakadinadinataki ena kena vakalailaitaki na MDA ena veivunikau e vakayagataki (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt).
Na kena revurevu ni kena vakayagataki na L-ornithine ena ivakatakilakila lelevu ni lomaocaoca kei na iwalewale ni veitaqomaki sega ni enzymatic ena drauni bini e tauvi S. (A) Peroxide de hidrógen (H2O2; nmol g-1 FW) en 72 hpt, (B) anión superoxide (O2•-; nmol g-1 FW) en 72 hpt, (C) malondialdehyde (MDA; nmol g-1 FW) en 72 hpt, (D) total soluble pheno (72 hpt) (E) taucoko ni flavonoids vakawaicalataki (mg RE g-1 FW) ena 72 hpt, (F) taucoko ni amino asidi galala (mg g-1 fw) ena 72 hpt, kei na (G) proline na lewena (mg g-1 fw) ena 72 hpt. Na isau e vakaraitaka na kena ibalebale ± ivakatagedegede ni veisau (kena ibalebale ± SD) ni 5 na veivakatautauvatataki ni bula (n = 5). Na ivola duidui e vakaraitaka na duidui bibi ni iwiliwili ena maliwa ni veiqaravi (p <0.05).